玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、滅菌

【中玻網】一、實驗目的要求
　　1、進一步加強學習、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技術。
　　2、為下一次的課做好器材的準備工作。
　　二、原理
　　為確保實驗順利地進行，要求把實驗所用的玻璃器皿清洗干凈。為保持滅菌后和無菌狀態(tài)，需要對培養(yǎng)皿、吸管等進行包扎，對試管和三角瓶等加塞棉塞。這些工作看起來很普通簡單，但如操作不當或不安操作規(guī)定去做，則會影響實驗結果，甚至會導致試驗的失敗。
　　滅菌原理：高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然后關閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。適用于一般培養(yǎng)基、玻璃器皿、無菌水、金屬用具。一般培養(yǎng)基在121．3℃滅菌20分鐘即可。干熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。細胞內的蛋白質凝固性與其本身的含水量有關，在菌體受熱時，當環(huán)境和細胞內含水量越大，則蛋白質凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。因此，與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160—170℃），時間長（1—2小時）。但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會烤焦，甚至引起燃燒，因而一般塑料制品不能用干熱滅菌。
　　三、試劑和儀器
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　　高壓蒸汽滅菌鍋、電熱烘箱、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿和吸管、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報紙、硅膠塞等
　　四、實驗內容
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　　l新購的玻璃器皿的洗滌
　　將器皿放入２％鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，以除去游離的堿性物質，較后用流水沖凈。
　　對容量非常大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉動容器使其內部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架上晾干，即可使用。
　　l常用舊玻璃器皿的洗滌
　　確實無病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用前后，可按常規(guī)用洗衣粉水進行刷洗；
　　吸取過化學試劑的吸管，先浸泡于清水中，待到一定數(shù)量后再集中進行清洗。
　　l帶菌玻璃器皿的洗滌
　　凡實驗室用過的菌種以及帶有活菌的各種玻璃器皿，必須經過高溫滅菌或消毒后才能進行刷洗：
　　1、帶菌培養(yǎng)皿、試管、三角瓶等物品，做完實驗后放入消毒桶內，用0.1MPa滅菌20～30min后再刷洗。含菌培養(yǎng)皿的滅菌，底蓋要分公開入不同的桶中，再進行高壓滅菌。
　　2、帶菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內消毒24h后，再經0.1MPa滅菌20min后，取出沖洗。
　　3、帶菌載玻片及蓋玻片，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內消毒24h后，用夾子取出經清水沖干凈。
　　如用于細菌染色的載玻片，要放入50g/L肥皂水中煮沸10min，然后用肥皂水洗，再用清水洗干凈。
　　u較后將載玻片浸入95%酒精中片刻，取出用軟布擦干，或晾干，保存?zhèn)溆谩?br />　　若用皂液不能洗凈的器皿，可用洗液浸泡適當時間后再用清水洗凈。
　　4、含油脂帶菌器材的清洗
　　單獨高壓滅菌：用0.1MPa滅菌20～30min→趁熱倒去污物→倒放在鋪有吸水紙的籃子上→用100℃烘烤0.5h→用5%的碳酸氫鈉水煮兩次→再用肥皂水刷洗干凈。
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　　不急用的玻璃器材：可放在實驗室中自然晾干；
　　急用的玻璃器材：把器材放在托盤中（大件的器材可直接放入烘箱中），再放入烘箱內，用80～120℃烘干，當溫度下降到60℃以下再打開取出器材使用。
　　（三）器皿的包扎：
　　要滅菌后的器皿仍保持無菌狀態(tài)，需在滅菌前進行包扎。
　　（1）培養(yǎng)皿：洗凈的培養(yǎng)皿烘干后每10套（或根據(jù)需要而定）疊在一起，用牢固的紙卷成一筒，或裝入特制的鐵桶中，然后進行滅菌。